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环状RNA疫苗

环状RNA ( circRNA ) 普遍存在于各类生物中,其分子呈共价闭环结构,具有线性RNA ( linear RNA ) 无法比拟的稳定性,极大程度避免了核酸外切酶对它的降解。对于circRNA疫苗来说,需要注意两个关键问题:一是需提高体外环化的效率,二是需关注circRNA的免疫原性。目前,常用的体外环化方式主要有以下几种:

恺佧生物可提供T4 RNA ligase1和RNase R用于体外RNA环化及纯化处理。 T4 RNA ligase1为ATP依赖型单链核酸分子(DNA 或 RNA)连接酶,催化供体的 5’磷酸基团和配体的 3’羟基形成  3’→5’磷酸二酯键并伴随ATP水解为 AMP 和 PPi。该酶作用的底物为 ssRNA、 ssDNA 和二核苷焦磷酸。其应用主 要体现在:1. RNA环化;2. 连接 RNA 和 RNA/DNA ;3. DNA 和 RNA 分子内及分子间的连接;4. miRNA 文库构建中  5’端接头的连接;5. RNA 3’末端标记等。

RNase R 来源于大肠杆菌,是一种依赖于Mg2+的3’→5’的核糖核酸外切酶,可消化几乎所有的线性RNA,但不易消 化环状RNA、套索结构或者3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA。除了tRNAs,5S RNA和内含子套索外,胞内其它 形式的RNA均会被RNase R消化掉。RNase R常用于可变剪切研究,将线性RNA消化掉从而富集得到环状RNA或套 索结构RNA。其应用主要为去除环状RNA中的线性RNA,应用于环状RNA的鉴定、富集。

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